采用ECT-快速转分化试剂盒，可以在10天内完成转分化，感染的GFP+细胞的转化效率>90%，经过分离纯化，大部分皮肤细胞株获得神经元的纯度>95%。

Day -5

1、提前准备待转化的皮肤成纤维细胞：按ScienCell公司推荐的方法培养，或在含有15% FBS及1X 青链双抗的高糖DMEM培养液中培养，一般需要5-7天可以长满汇合，每株细胞约需要2-3皿10cm培养皿。

Day -1

1、解冻包被液（ECT-CS）：在4℃过夜解冻或室温水浴快速解冻使用，避免多次反复冻融。

2、包被培养皿：把10 ml ECT-CS用DMEM稀释到50 ml，移取5 ml/皿，共10皿，置于37℃细胞培养箱中孵育过夜，用前吸去包被液即可，不需要洗涤，但应避免包被表面挥干。 

Day 0

1、皮肤成纤维细胞消化、计数与培养：吸去培养液，DPBS洗涤，胰酶37℃消化4分钟，加培养液中和胰酶并吹打成单细胞悬液，计数后在每个包被培养皿中加入8×10^5个细胞，摇匀后转入5% CO2细胞培养箱。

2、慢病毒解冻：在室温水浴中快速解冻后，酒精喷洗冻存瓶、擦拭后转入生物安全柜中操作。

3、慢病毒感染：皮肤成纤维细胞完全贴壁（一般约3-6小时）后，吸去培养液，立即小心加入慢病毒（7-10 ml/10 cm培养皿），转入37℃细胞培养箱（5% CO2）继续培养过夜。 

Day 1

1、成纤维细胞培养液换液：慢病毒感染18小时后，把含有残余病毒的培养液吸入含有84消毒液的废液瓶中，然后尽快加入10 ml/皿新鲜的成纤维细胞培养液，转入37℃细胞培养箱（5% CO2）继续培养过夜。 

Day 2 and Onward 

1、转分化培养液配制：把0.25 ml ECT-S7及10 ml ECT-NIMS加入250 ml 室温平衡的ECT-NIM中，混匀后即可使用，余下置于4℃避光保存。 

2、快速转分化：在感染后第2天，吸去皮肤成纤维细胞培养液，加入10 ml/皿转分化培养液ECT-NIM，之后每2天行半换液。感染细胞表达GFP，转化5天后在荧光显微镜下可观察到胞体变小、隆圆饱满、突起生长等形态变化，至第10-12天基本转分化为神经细胞，此时可进行分离纯化、继续培养、鉴定分析及应用。