人源病龄运动神经元ECT-MN

       采用ECT技术从人皮肤成纤维细胞直接诱导转化制备的正常人或患者病龄运动神经元（ECT-MN），保留了源细胞的年龄属性，并具有正常人或患者运动神经元的生理功能或病理特征。在与年龄密切关联的疾病（如渐冻人症，ALS）机理研究及药物研发中，病龄ECT-MN系列产品是现有胚龄运动神经元（如iPSC分化产品）的一种理想的替代产品，更利于揭示随年龄增长出现的致病基因表达变化相关联的病理机制，发现诊断指标，或筛选研发作用于年龄相关靶点的有效化合物。

报告基因GFP阳性运动神经元产品纯化后培养示意图。

A. 新生儿 ECT-MN101 纯化后过夜培养；

B. 成年人 ECT-MN601 纯化后过夜培养。标尺=100µm。

运动神经元冻存复苏及长期培养示意图

A. ECT-MN101 冻存复苏后在 ECT-CR 包被的盖玻片过夜培养；

B. ECT-MN101 冻存复苏后在小鼠前脑星形胶质细胞包被的盖玻片过夜培养,标尺=100µm；

C. ECT-MN101 在 ECT-CR 包被的培养孔板上可以长期培养至3个月以上，形成致密神经网络,标尺=20µm。 

运动神经元表达一般神经元特征蛋白质示意图：Tuj1, 99%；MAP2, 99%

A. GFP 阳性 ECT-MN-SMA01 表达一般神经元特征蛋白 Tuj1%；

B. GFP 阳性 ECT-MN-SMA01 表达一般神经元特征蛋白 MAP2，标尺=50µm。

运动神经元表达运动神经元特征标志蛋白质示意图：HB9, 99%；ChAT, 99%

A. GFP 阳性 ECT-MN-SMA01 表达运动神经元特征标志蛋白质 HB9；

B. GFP 阳性 ECT-MN-SMA01 表达运动神经元特征标志蛋白质ChAT，标尺=50µm。

培养时间与形态特征：接种后快速贴壁并长出神经突起，可长期培养至三个月以上，其胞体隆起饱满，神经突起持续生长、分叉延伸并形成神经网络。

功能/病理特征：正常人 ECT-MN 与肌肉细胞共培养可以形成特异性神经肌肉接头（NMJ），调控肌肉收缩；ALS 患者 ECT-MNALS 形成的 NMJ 很少，不能有效调控肌肉收缩。

年龄特征：与新生儿皮肤细胞转化的 ECT-MN101 比较，成年人皮肤细胞转化的ECT-MN601 显示了老化相关的显著特征。

运动神经元年龄相关特征示意图

A.衰老标记物 β-Gal 染色在成年人 ECT-MN601 中显著增强，标尺=50µm；

B. 端粒保护性抗氧化酶（PRDX1）表达水平在成年人 ECT-MN601 中显著降低，标尺=20µm；

C. 长寿相关异染色质蛋白（HP1γ）表达水平在成年人 ECT-MN601 中显著降低，标尺=20µm。